植物組培污染防治問(wèn)題

（1）污染的來(lái)源。

植物組培污染主要是霉菌、細(xì)菌和酵母菌引起的污染。霉菌和酵母菌在培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)快，很容易觀察到，而細(xì)菌潛伏期長(zhǎng)，植物組織一般不表現(xiàn)癥狀，所以很難在前期和肉眼觀察到。國(guó)外有關(guān)學(xué)者認(rèn)為細(xì)菌污染的來(lái)源主要有三個(gè)：一是材料內(nèi)部滅菌處理不好，這樣造成的污染占污染總數(shù)的1/3～1/2。二是在正常的滅菌的條件下，內(nèi)生菌能夠存活，這樣的污染占污染源的1/4。三是來(lái)自寄生植物的污染占1/4～1/2。同時(shí)認(rèn)為有些植物的昆蟲(chóng)和螨蟲(chóng)的體表帶有霉菌的孢子和細(xì)菌，在九、十月份是重要的污染源，因多種植物昆蟲(chóng)處在大量繁殖階段，此時(shí)大量昆蟲(chóng)造成的污染源最易造成組培污染的嚴(yán)重發(fā)生。近六年來(lái)，我們通過(guò)對(duì)獼猴桃、櫻桃、托柄菝葜及大花非洲菊初級(jí)培養(yǎng)污染的研究中發(fā)現(xiàn)，高溫、多雨的環(huán)境更有利于污染的發(fā)生，而且隨著植物材料年齡的增長(zhǎng)，植物材料的健康狀況不斷惡化，組培污染也會(huì)更加嚴(yán)重。另外，外植體的狀況，環(huán)境條件和操作過(guò)程也是引起污染的主要原因。

（2）抗生素對(duì)細(xì)菌污染的防治。

植物組培污染的控制取決于滅菌技術(shù)、滅菌設(shè)備、外植體年齡和環(huán)境條件等許多方面。盡管在植物組培過(guò)程中盡量使無(wú)菌條件更完善，但是污染還是經(jīng)常發(fā)生，甚至有時(shí)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的組培苗突出污染而全部死亡，這是無(wú)法挽回的巨大損失，因此人們對(duì)細(xì)菌污染研究的較多。細(xì)菌污染的消除有些研究人員希望用抗生素防治，抗生素可以直接加入到培養(yǎng)基中，也可以用抗生素噴灑或浸泡外植體。但植物種類(lèi)不同，所用抗生素的種類(lèi)、濃度和處理時(shí)間也不同，還有的抗生素對(duì)污染消除根本不起作用，因此必須對(duì)不同植物采用不同的抗生素的種類(lèi)、濃度和處理時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)探討。一般情況下，為消除革藍(lán)氏陽(yáng)性菌對(duì)有些木本植物污染莖段組培苗，可在培養(yǎng)基中加入氨中噻肟頭孢菌素、四環(huán)素、利福平和多粘菌素B分別以25mg/L、25mg /L、6mg/L和6mg/L濃度的混合物，可使細(xì)菌完全被消除。另外，用頭孢菌素Ⅱ和鏈霉素消除某些觀賞植物外植體中的內(nèi)生菌也有非常明顯的效果?？傊槍?duì)不同植物品種要想找到一種合適的抗生素處理組合是比較困難的，工作也較繁瑣。國(guó)內(nèi)外有關(guān)學(xué)者都認(rèn)為沒(méi)有一種抗生素對(duì)所有的細(xì)菌都有效，即使有效，抗生素消除植物組培污染的方法也是暫時(shí)的解決方案，如果長(zhǎng)期使用抗生素消除污染，必然對(duì)組培苗的生長(zhǎng)、分化和生根造成一定的影響。

（3）真菌污染的防治。

抗生素消除細(xì)菌的研究比較多，但目前酵母菌污染的研究相對(duì)較少，G B Poulsen等（1988）在蘋(píng)果砧分裂組織微生物消除的研究中，測(cè)試了幾種物質(zhì)對(duì)酵母菌的毒性，雖然它們對(duì)植物材料都沒(méi)有傷害，但是沒(méi)有一種能夠消除酵母菌。胍類(lèi)化合物是對(duì)兩種酵母菌有毒的唯一復(fù)合物，但它對(duì)分裂組織有毒害作用。霉菌污染的一個(gè)重要特點(diǎn)是迅速，難控制。目前，關(guān)于霉菌污染的研究還很少，有人建議用防腐劑消除霉菌污染，但是還未見(jiàn)報(bào)到。

（4）常用防治污染方法。

目前外植體表面滅菌的方法除常規(guī)的氯化汞、雙氧水、酒精和次氯酸鈉外，用于廁所消毒的家凈也是一種良好的表面殺菌劑。G Rreustle等學(xué)者在對(duì)葡萄組織培養(yǎng)污染的研究中發(fā)現(xiàn)家凈表面消毒效果很好，家凈雖然效果極好，價(jià)格便宜，但內(nèi)生菌潛伏期長(zhǎng)，內(nèi)寄生性強(qiáng)，危險(xiǎn)性大，對(duì)內(nèi)生菌而言，任何一種表面消毒劑對(duì)外植體的內(nèi)生菌幾乎都是無(wú)能為力的，除了在培養(yǎng)基中加入殺菌劑消除植物組培污染外，還有許多其他的方法減少污染，如用抗微生物藥劑定期噴灑活植物新梢、在新梢或發(fā)芽期套袋法隔絕微生物的侵入等方法來(lái)獲得外植體接種消毒成功率。另外，培養(yǎng)環(huán)境和接種環(huán)境的各處不同，滅菌的方法以及新型殺菌設(shè)備的應(yīng)用在植物組培污染中也起著一定的重要作用。