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文章出處:常見問題 網(wǎng)站編輯: 冠石凈化 閱讀量: 發(fā)表時間:2020-11-11 11:24:22
植物組織培養(yǎng)與細胞培養(yǎng)開始于19世紀后半葉,當時植物細胞全能性的概念還沒有完全確定,但基于對自然狀態(tài)下某些植物可以通過無性繁殖產(chǎn)生后代的觀察,人們便產(chǎn)生了這樣一種想法即能否將植物體的一部分在適當?shù)臈l件下培養(yǎng)成一個完整的植物體,為此許多植物科學工作者開始了培養(yǎng)植物組織的嘗試。最初的問題仍然是集中在植物細胞有沒有全能性和如何使這種全能性表現(xiàn)出來。
1839年Schwann提出細胞有機體的每一個生活細胞在適宜的外部環(huán)境條件下都有獨立發(fā)育的潛能。1853年trecul利用離體的莖段和根段進行培養(yǎng)獲得了愈傷組織,愈傷組織是指一種沒有器官分化但能進行活躍分裂的細胞團,但這還不能證明細胞具有全能性,因為由愈傷組織沒能再生出完整植物體。
1901年Morgan首次提出一個全能性細胞應具有發(fā)育出一個完整植株的能力。所謂全能性細胞就是指具有完整的膜系統(tǒng)和細胞核的生活細胞,在適宜的條件下可通過細胞分裂與分化,再生出一個完整植株。White指出:如果一個給定的有機體的所有細胞都大致相同,并具有全能性,那么在有機體內所觀察到的細胞分化必定是這些細胞對有機體內微環(huán)境和周圍環(huán)境的反應。就是說機體內每個細胞所以沒有表現(xiàn)出全能性,是因為該細胞所處位置的不同,致使其某些功能被抑制(suppressed),這充分說明機體內的微環(huán)境因素在細胞分化中起了十分重要的作用。按照現(xiàn)代發(fā)育生物學和細胞生物學的理論,細胞分化是受基因在時間和空間兩個方面的調控,空間就是指細胞在機體內所處的位置。不同位置的細胞,其基因的表達不同,細胞所表現(xiàn)出的形態(tài)結構和行為就不同。如果將一個生活的細胞從植物體內分離出來,使之脫離開原有的環(huán)境,細胞被抑制的功能將有望得以恢復,重新表現(xiàn)出全能性。基于這種認識,科學工作者便萌生出了植物組織培養(yǎng)的念頭。
組培育苗必要的儀器設備:為了順利地開展組培育苗工作,要建立一套組培育苗工作的設施,其中包括準備室、接種室、培養(yǎng)室和相應的溫室等。建筑面積可根據(jù)工作量的大小而定。
(1)準備室主要功能是貯放配制培養(yǎng)基所必需的化學試劑及儀器設備,如冰箱、烘箱、天平、顯微鏡、酸度計、高壓滅菌鍋、玻璃器皿及洗滌設施等,并為配制培養(yǎng)基、分裝和滅菌等操作提供便利的條件。
?。?)接種室主要供接種、轉移和繼代培養(yǎng)用。要求室內光潔,能在無菌條件下進行操作。一般是購置超凈工作臺,配備用于對外植體進行分割、消毒和接種的工具和器皿等。
?。?)培養(yǎng)室主要為試管植物的生長發(fā)育提供適宜的環(huán)境條件。要求有控制溫度和照明的設備、放置試管等物的架子、消毒用紫外燈等。
2.培養(yǎng)基的組成與配制:培養(yǎng)基是用于組織培養(yǎng)繁育花苗的物質。它包括植物的細胞、組織或器官再生所必需的大量元素、微量元素、蔗糖、維生素、氨基酸和植物激素等。
用于繁殖花卉植物常用的培養(yǎng)基有:MS、H、N6、尼許(Nitsh)、懷特(White)、米勒(Miller)培養(yǎng)基等。
配制培養(yǎng)基與配制營養(yǎng)液基本相同,只是在加入無機鹽之后不定容,而是以每升培養(yǎng)基所需的粉劑原料加水800毫升左右,加熱煮沸,使瓊脂完全融溶,冷卻到80℃左右加入蔗糖,60℃左右加入有機物,調節(jié)氫離子濃度并定容,在溫度尚未降至40℃以前,盡快分裝到試管或三角瓶中,用棉塞或牛皮紙封口,然后在120℃溫度下滅菌15分鐘。
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