馬鈴薯組織培養(yǎng)及原原種生產(chǎn)技術(shù)

　　馬鈴薯組織培養(yǎng)

　　1、繁殖瓶苗

　　將待繁脫毒苗在無菌條件下每葉節(jié)切一段，接種在僅含大量元素、微量元素和鐵鹽的無激素MS固體或液體（可用紙橋）培養(yǎng)基的組培瓶中，置培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為：光照1000-3000lx,光周期13-16h/d,培養(yǎng)溫度（25±2）℃，空氣相對(duì)濕度50%-60%，自然通風(fēng)。葉節(jié)段接種30-50d后長成3-5片葉的幼苗。記錄苗芽發(fā)生時(shí)間，生長狀況，污染率。再按照上述方法重復(fù)進(jìn)行擴(kuò)繁，直到達(dá)到要求繁殖數(shù)量為止。

　　2、繁殖微型薯

　　將上述具有3-5片葉幼苗，加入液體培養(yǎng)基（MS+BA2-10mg/L)或（MS+BA2-10mg/L+IAA1mg/L+CCC100-500mg/L+糖80-100g/L),放入培養(yǎng)室，遮光全黑暗或光照時(shí)數(shù)少于8h/d，溫度（20±2）℃，空氣相對(duì)濕度50%-60%，自然通風(fēng)。

　　經(jīng)40-70d后，在植株葉腋處長出微型薯。記錄微型薯發(fā)生時(shí)間，生長狀況，污染率。

　　馬鈴薯組織培養(yǎng)及原原種生產(chǎn)技術(shù)

　　馬鈴薯組織培養(yǎng)及原原種生產(chǎn)技術(shù)病毒和類病毒的累積性感染是引起馬鈴薯種性退化的重要因素，而通過組織培養(yǎng)獲取無病毒種薯來恢復(fù)種性的方法已被馬鈴薯生產(chǎn)地區(qū)廣泛采用?，F(xiàn)將馬鈴薯組織培養(yǎng)方法和原原種生產(chǎn)技術(shù)介紹如下：

　　1  馬鈴薯組織培養(yǎng)

　　1.1外植體培養(yǎng)

　　從已催出芽（芽長一般2—4cm）的干凈健康馬鈴薯塊莖上掰下芽，用自來水

　　沖洗干凈，放入0.1—0.15%的升汞溶液中浸泡8—10分鐘，在超凈工作臺(tái)上消毒完后，放入無菌水中浸泡6次，每次5分鐘，然后接種到MS＋6－BA1.5mg/L（毫克/升）＋GA3 0.5mg/L＋I(xiàn)BA0.5mg/L＋瓊脂8g/L＋蔗糖30g/L（PH值為5.8）的培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)瓶接種1—5個(gè)外植體。

　　1.2莖尖剝離及初代培養(yǎng)

　　外植體培養(yǎng)20天后，在超凈工作臺(tái)上解剖鏡下用解剖針將生長點(diǎn)0.1——0.5mm部分剝離出來，轉(zhuǎn)接到MS＋肌醇100mg/L+6－BA1.5mg/L＋GA30.5mg/L＋泛酸鈣1.5mg/L＋蔗糖30g/L＋瓊脂8g/L＋活性炭0.17g/L（PH值為5.8）的培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)瓶接種4—5個(gè)生長點(diǎn)。光照保持3000—6000Lux（勒克斯）左右，每天照光13—16小時(shí)，溫度控制在23℃，經(jīng)2—6個(gè)月左右培養(yǎng)誘導(dǎo)，其間轉(zhuǎn)接2——3次，生長點(diǎn)即可長成新的小植株。經(jīng)病毒檢測不帶病毒的株系就可進(jìn)行擴(kuò)繁，未脫毒的株系淘汰。

　　1.3試管苗擴(kuò)繁

　　1.3.1擴(kuò)繁前的準(zhǔn)備

　　1.3.1.1擴(kuò)繁培養(yǎng)基的制備。擴(kuò)繁培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為擴(kuò)繁基本培養(yǎng)基，外加6-BA

　　0.5mg/L+NAA0.5～1.5mg/L+蔗糖30g/L＋瓊脂8g/L＋活性炭0.17g/L，pH值為5.8。

　　1.3.1.2把接種用具在超凈工作臺(tái)上用紫外線燈消毒20～30分鐘，關(guān)掉紫外線燈，打開日光燈和吹風(fēng)機(jī)。

　　1.3.1.3用肥皂把手洗干凈并擦干，再用75%酒精消毒，待手上酒精干后，點(diǎn)上酒精燈，把剪子、鑷子培養(yǎng)皿等所需用具在酒精燈上進(jìn)行消毒。

　　1.3.2接種擴(kuò)繁

　　用75%酒精噴待接的試管苗和制備好待用的擴(kuò)繁培養(yǎng)基表面，將已脫毒株系按每

　　苗留1～2片葉為一個(gè)莖段剪下，正向插入擴(kuò)繁培養(yǎng)基（即MS＋6-BA0.5mg/L＋NAA0.5～1.5mg/L＋蔗糖30g/L＋瓊脂8g/L＋活性炭0.17g/L，PH值為5.8的培養(yǎng)基）上。一般每個(gè)培養(yǎng)瓶接種15個(gè)莖段，在溫度25～27℃,光照2000～3000Lux，每天15～16小時(shí)條件下培養(yǎng)3～4天即可生根長芽。30天后可按1：7瓶進(jìn)行擴(kuò)繁一次，即原來每瓶15苗擴(kuò)繁一次可達(dá)7瓶105苗，以后每隔30天擴(kuò)繁1次，繁殖到目標(biāo)苗數(shù)后，再經(jīng)2～3個(gè)月培養(yǎng)即可扦插到原原種繁殖網(wǎng)室，進(jìn)行原原種繁殖。

　　2  網(wǎng)室原原種生產(chǎn)

　　試管苗扦插到繁殖網(wǎng)室后生產(chǎn)出重1g以上可用于繁殖原種的微型種薯叫原原種，又稱試管薯、迷你薯。

　　2.1繁殖網(wǎng)室的構(gòu)建

　　用隔蟲網(wǎng)溫室進(jìn)行原原種生產(chǎn)，不僅可進(jìn)行大面積高密度無土栽培，而且繁殖速度快，生產(chǎn)數(shù)量多，質(zhì)量好。網(wǎng)溫室一般頂高2.2—2.8m，側(cè)高1.8—2.0m，長和寬據(jù)場地大小而定，長一般30m以上，寬4.5—6m。上面覆蓋防蟲網(wǎng)，以防止害蟲特別是傳播馬鈴薯病毒的主要媒介蚜蟲進(jìn)入，暴雨來臨時(shí)可加蓋塑料薄膜防雨，夏季烈日暴曬時(shí)可加蓋遮陽網(wǎng)遮陽。為便于管理，網(wǎng)室內(nèi)用磚砌寬1.2m，高0.4m，中間留0.5m走道的苗床。人員進(jìn)入時(shí)要換消過毒的工作服，用1%甲醛洗手，禁止抽煙。網(wǎng)室內(nèi)澆水和排水要方便，基質(zhì)和空間要作嚴(yán)格充分的消毒。

　　2.2基質(zhì)的準(zhǔn)備

　　馬鈴薯試管苗網(wǎng)室繁殖用的無土基質(zhì)主要有鋸木、粗糠、炭渣、珍珠巖、蛭石、河沙等。其中最好的基質(zhì)是蛭石，無病菌、膨松，但成本高；其次是珍珠巖；最后是河沙，易漬水，易死苗，但成本低，結(jié)薯率高，為大量繁殖脫毒馬鈴薯原原種最常用基質(zhì)。基質(zhì)適宜的PH值為6—7,偏酸或偏堿都要進(jìn)行調(diào)節(jié)。

　　2.3網(wǎng)室及基質(zhì)消毒

　　2.3.1網(wǎng)室消毒

　　網(wǎng)室建好后，應(yīng)用“功夫”殺滅地下害蟲，用抗蚜威滅蚜，空間用高錳酸鉀水溶液噴霧，網(wǎng)室周圍要經(jīng)常除草。網(wǎng)室內(nèi)每收完一茬薯，都要進(jìn)行1次空間消毒和基質(zhì)滅菌。

　　2.3.2基質(zhì)滅菌

　　在繁殖苗床內(nèi)放入20—30cm厚的河沙，用0.3%的甲醛溶液澆濕，然后用塑料薄膜覆蓋7天，期間放風(fēng)兩次，每次1小時(shí)，揭膜5～7天后插苗（用蛭石和珍珠巖作基質(zhì)，第一次使用時(shí)可不進(jìn)行消毒）。

　　2.4栽培管理

　　2.4.1試管苗扦插

　　扦插前1天在苗床上澆清水，濕度2—3cm，最多不超過5cm；第2天再澆1次后刮平墑面。將瓶苗打開澆少量清水，然后取出試管苗洗凈培養(yǎng)基，用消毒剪從基部剪下按早熟種2×5cm、中晚熟種3×7cm用竹筷劃溝扦插（若試管苗根數(shù)少可不剪而直接進(jìn)行扦插）；若試管苗長超過10cm可按5cm（留2—3個(gè)節(jié)）一段剪成若干莖段進(jìn)行扦插，扦插深度2—3cm，苗長可埋入2—3個(gè)節(jié)，苗短1—2個(gè)節(jié)。苗插好后澆定根水2—3次，吸透為止。

　　2.4.2水肥管理

　　2.4.2.1澆水：扦插后相對(duì)濕度保持95～100%，每天用七功能的噴槍或?yàn)⑺畨貒姙?～8次水，主噴地上部分，防止萎蔫，5～15天（冬季15天、夏季5天）后開始生根、長新葉。扦插15天后1～3天澆1次透水，一般掌握陰雨天不澆，基質(zhì)上部不干不澆，暴雨天氣還應(yīng)注意防雨。收獲前15—20天停止?jié)菜?/p>

　　2.4.2.2追肥：扦插生根后（即扦插15天后）開始追施1號(hào)營養(yǎng)液（用N、P、K之比為15：15：15三元復(fù)合肥50g＋水20kg），按每2～3kg/m2澆施，每周2次，澆后用霧狀水洗苗，洗至葉子滴水為度。30天后施2號(hào)營養(yǎng)液（用N、P、K之比為15：15：15三元復(fù)合肥60g＋硫酸鉀5g+普鈣5g＋水20kg），按每2～3kg/m2澆施，每周1次，澆后用霧狀水洗苗。60天后1、2號(hào)營養(yǎng)液交叉使用，3—4天1次。收獲前15～20天停止追肥。

　　2.4.3溫度控制

　　網(wǎng)室溫度保持15～27℃，夏季氣溫高，應(yīng)注意網(wǎng)室通風(fēng)，也可用70%遮光率的遮陽網(wǎng)遮擋扦插苗至成活后揭開，冬季氣溫低時(shí)可加蓋塑料薄膜增溫，同時(shí)注意通風(fēng)和光照情況。

　　2.4.4中耕培土除草

　　試管苗扦插后30天左右開始第一次樹苗培土，培土高度不宜過高，一般1～2cm；扦插后50天左右第二次培土，培土高度3～4cm。同時(shí)從試管苗扦插到收獲期間都要注意及時(shí)人工撥除雜草。

　　2.4.5病蟲害防治

　　2.4.5.1病害防治

　　主要病害有早、晚疫病，特別在陰雨天氣發(fā)病率最高。發(fā)病前遇陰天雨季可用1000—1500倍液瑞毒錳鋅噴霧預(yù)防，每隔7天1次，連噴2次；發(fā)病后用800—1000倍液瑞毒錳鋅噴霧，每隔7天1次，連噴2～4次；也可用1：1：200倍的波爾多液進(jìn)行防治，每隔7～12天1次，連噴4次。

　　2.4.5.2蟲害防治

　　網(wǎng)溫室主要害蟲有蚜蟲、白粉虱、螨類及地下害蟲地老虎等。蚜蟲防治要注意檢查網(wǎng)室，及時(shí)防堵漏洞，嚴(yán)防蚜蟲侵入傳毒。溫室白粉虱可用敵敵畏1000倍稀釋液加溴氰菊酯3000倍稀釋液噴霧，每隔3～7天1次，連噴3次。螨類可用800倍三氯殺螨醇防治。地老虎在有土栽培條件下容易發(fā)生，而在無土栽培條件下則很少發(fā)生。

　　2.4.6適時(shí)收獲、儲(chǔ)藏

　　馬鈴薯苗生長后期，停水停肥后，其營養(yǎng)生長逐漸減緩、停止。當(dāng)薯苗變黃，薯皮老化時(shí)即可收獲種薯。早熟種一般90天左右收獲，每株收種薯3—5粒；晚熟種100～110天

　　左右收獲，每株收種薯5～6粒。新收獲的種薯含水量較高，需晾干，但不能在陽光下直曬，晾干的種薯分級(jí)后分別放在編織袋、尼龍網(wǎng)袋等透明的容器中，按不同品種、不同收獲日期分別儲(chǔ)存，以免混雜。

　　脫毒馬鈴薯原原種的休眠期約60～80天，用赤霉素處理能打破休眠，加快萌芽速度，萌芽時(shí)間可縮短30天左右。處理方法是用30～40ppm赤霉素浸泡20～30分鐘，或?qū)⒃N放入冰箱在2～8℃條件下保存，播種前2個(gè)月從冰箱中取出，在室溫下促其萌動(dòng)、生芽。原原種萌芽后便可拿到高海拔地區(qū)進(jìn)行原種繁殖。

　　2.5莖尖扦插擴(kuò)繁

　　莖尖扦插擴(kuò)繁是在試管苗數(shù)量不足的情況下，以試管苗扦插苗為母本，剪取其莖尖進(jìn)行扦插的一種快速繁殖方法。

　　2.5.1莖尖的剪取

　　以扦插成活的試管苗為母株，在母株扦插30天后剪取其莖尖1～2葉1心或2～3葉1心進(jìn)行扦插，剪取量30～40%；7～10天后第二次剪，剪取量100%；40天后每隔7天可剪一次莖尖進(jìn)行扦插。母株一般最多可剪半年。剪苗次數(shù)越多，生育期越長，結(jié)薯個(gè)數(shù)越多。剪取莖尖達(dá)半年的母株單株結(jié)薯可達(dá)50粒以上。母株在收獲前30天停止采苗，并停止?jié)菜贩?，促進(jìn)營養(yǎng)轉(zhuǎn)移，使苗不戀青，薯塊迅速成熟，小薯塊也能作種。

　　2.5.2莖尖扦插

　　將剪下的莖尖泡在清水里（如苗老可用3～5ppm赤霉素或奈乙酸浸泡5分鐘再扦插），用竹筷在澆透水的墑面上按2×3cm或3×4cm的株行距插2～3cm深的小洞，然后把剪下莖尖的第1個(gè)節(jié)放在洞里（所埋葉和節(jié)會(huì)產(chǎn)生掖芽薯），栽幾行后就要澆水2～3次，使其自然封洞，確保苗不萎蔫。

　　2.5.3水肥管理

　　水分管理與試管苗扦插相同。收獲前15～30天停止?jié)菜Ｇo尖扦插后15天開始施1號(hào)肥，每隔7天1次，共施2次；然后施2號(hào)肥，每隔7天1次，共施2次；45天后1、2號(hào)肥交叉使用，3～4天1次，收獲前15～30天停止追肥。

　　2.5.4中耕培土除草及病蟲害防治

　　莖尖扦插一般在扦插后15天進(jìn)行1次培土，培土高度3cm。除草及病蟲害防治方法與試管苗扦插相同。

　　2.5.5收獲、儲(chǔ)藏

　　早熟種一般60天左右收獲，每株可收種薯1—2粒；晚熟種80—90天左右收獲，每株可收種薯3—4粒。