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文章出處:行業(yè)動態(tài) 網(wǎng)站編輯: 冠石凈化 閱讀量: 發(fā)表時間:2020-11-20 15:57:18
組培室設(shè)計規(guī)劃之滅菌室布局
滅菌室好和配制培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室相鄰或盡量靠近,因配制好的培養(yǎng)基和一些器皿需要盡快進(jìn)行高溫高壓滅菌,如果兩處相距太遠(yuǎn)會給工作帶來諸多不便。滅菌室面積可小一些,其內(nèi)除放滅菌鍋外好還有臨時存放培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿的架子,也應(yīng)有自來水裝置。滅菌室可根據(jù)滅菌鍋的多少,工作量的大小來確定面積,要求房間能有較好的通風(fēng)散熱條件,且要配備專門的電源線路,因?yàn)殡姛釡缇伒暮碾娏亢艽螅胀ǖ恼彰骶€路或動力線很難承受。滅菌鍋是一種高溫高壓容器,操作人員應(yīng)有一定的專業(yè)技術(shù)訓(xùn)練才能操作,且在操作過程中一定要認(rèn)真、負(fù)責(zé)、細(xì)心,及時檢查核對鍋內(nèi)的水位、鍋上的壓力表、放氣閥、安全閥等,看看是否正常,切莫違規(guī)操作,釀成事故。在使用一段時間之后,好請有關(guān)質(zhì)檢部門核查校正一下滅菌鍋上的壓力表。
組培室設(shè)計規(guī)劃之生產(chǎn)規(guī)模的確定
采用組培快繁技術(shù)進(jìn)行植物種苗的工廠化生產(chǎn),包括入選品種外植體的篩選及獲取、外植體滅菌誘導(dǎo)培養(yǎng)、無菌材料繁殖、繼代擴(kuò)繁、單株生根、出瓶過度煉苗、包裝進(jìn)入市場等工藝程序。由于組培苗生產(chǎn)從進(jìn)瓶到出瓶都是在無菌條件下完成,故考慮建設(shè)一個組培工廠生產(chǎn)規(guī)模時通常以購買多少無菌工作臺來衡量,原則上,根據(jù)繁殖品種的不同一個無菌工作臺可按年生產(chǎn)15-20萬苗計算。如規(guī)劃一個生產(chǎn)量達(dá)500萬株的組培室,需設(shè)25-30個無菌操作位置。另外一種計算方法是,根據(jù)市場需求規(guī)律,按高供應(yīng)季節(jié)需求量除以月生產(chǎn)量來確定必須購置的無菌工作臺數(shù)量。當(dāng)工作臺數(shù)量確定后,才能設(shè)計無菌工作臺的擺放方式,計算出接種室的需求面積。按日生產(chǎn)組培苗瓶數(shù)及培養(yǎng)期,結(jié)合周轉(zhuǎn)期計算需要的培養(yǎng)架數(shù)量,以此為基礎(chǔ)很容易就可以計算出培養(yǎng)室需求面積,一般為一臺無菌工作臺,需配備培養(yǎng)架4架(1.2m×0.5m×5層),無菌操作室與培養(yǎng)室的面積比例為1:(1.5-2.0),或者根據(jù)培養(yǎng)架數(shù)量確定培養(yǎng)室面積,一般每個培養(yǎng)架需要1.0-1.2個m2。圍繞組培工廠建設(shè),其他必備的配套設(shè)施設(shè)備及操作用具購置的數(shù)量,應(yīng)以每個無菌工作臺的需求量計算,解剖刀、鑷子、刀片等常用工具還要有充足的備用量。試管苗出瓶、移栽需要安排在過渡培養(yǎng)溫室或大棚內(nèi)進(jìn)行。現(xiàn)代的組培工廠還需要建有種質(zhì)資源保存圃、原原種、原種圃、生產(chǎn)性栽培展示區(qū)等,其面積的大小應(yīng)根據(jù)不同植物的種類來確定。因此現(xiàn)代化組培工廠的建設(shè),需要認(rèn)真規(guī)劃、仔細(xì)計算、合理投資,使之既有系統(tǒng)性又實(shí)用,才能充分發(fā)揮大的生產(chǎn)潛力。在今后的市場競爭中,盡量降低成本,提高產(chǎn)品質(zhì)量和品種的可靠性。
組培室設(shè)計規(guī)劃之儀器設(shè)備配置篇
在植物組織培養(yǎng)過程中,根據(jù)所培養(yǎng)的植物種類、生產(chǎn)規(guī)模,選擇合適的器材、設(shè)施是十分必要的,只有這樣才能確保整個操作過程的順利進(jìn)行。在器材、設(shè)施的選擇上,不要貪大求洋,應(yīng)該在其是否實(shí)用上多下功夫。在研究型的組織培養(yǎng)操作中,往往對器材、設(shè)施的要求較高;而在生產(chǎn)型的組織培養(yǎng)中,則對器材、設(shè)施的要求卻較為粗放,因此管理者必須根據(jù)實(shí)際情況來進(jìn)行培養(yǎng)器材、設(shè)施的遴選。
在植物組織培養(yǎng)的過程中,從外植體的采收到試管苗的定植都必須要在特定的環(huán)境中進(jìn)行,例如,培養(yǎng)基的配制要在專用的器材、設(shè)施中進(jìn)行;外植體的接種要在專用的器材、設(shè)施中進(jìn)行。應(yīng)該根據(jù)植物組織培養(yǎng)不同階段的需要,選擇不同的器材、設(shè)施。只有從降低投入、提高工效、節(jié)約勞力等諸方面加以考慮,才能降低培養(yǎng)成本、提高培養(yǎng)效率。
在植物組織培養(yǎng)過程中,所使用的器材種類較多,但它們通??梢苑譃橥ㄓ闷骶摺⑹⒕?、計量器械、滅菌器械、接種器械、培養(yǎng)器械等幾種類型。在使用這些容器、設(shè)備時,必須要了解它們的基本用途,并學(xué)會它們的基本用法。例如,不能給容量瓶加熱;必須用磨砂玻璃燈罩來熄滅正在燃燒的酒精燈;應(yīng)該定期更換超凈工作如的無菌濾膜等等。詳細(xì)操作可參考具體設(shè)備、容器的使用說明。
?。?)通用器械
?、贌河脕硎⒎拧⑷芙饣瘜W(xué)藥劑等。常用的規(guī)格有50ml、100ml、250ml、500ml、1000ml。
?、诤嫦洌河脕砗娓善餍?。
③恒溫水?。河脕砣芙猸傊任镔|(zhì)。
④玻璃攪拌棒:用來配制培養(yǎng)基。
?、菹炊颍河脕磔o助吸取、轉(zhuǎn)移少量液體。
?、薇洌河脕碣A存化學(xué)藥劑、植物材料等。
?、吲=巧祝河脕磙D(zhuǎn)移化學(xué)藥劑。
?、嗖A┒罚河脕磉^濾溶液。
⑨剪刀:用來修剪外植體或剪切嫩莖。
?、馄餍导埽涸跓o菌操作期間用來放置滅菌的器械。
?。?)各種盛具
?、偬麓蓽\盤:用來承載各種器械容器。
?、谒芰吓瑁河糜谇逑磁囵B(yǎng)容器。
?、坭F絲筐:用來盛放滅菌容器等物品。
④純水水桶:用來存放去離子水或蒸餾水。常用的規(guī)格有10L、20L。
⑤塑料桶:用來存放洗滌溶液、廢棄溶液。
?、薷鞣N規(guī)格的磨砂玻璃瓶:用來盛放培養(yǎng)母液,以及各種植物生長物質(zhì)。
?。?)計量器械
?、倭客玻河脕砹咳∫欢w積的液體。常用的規(guī)格有25ml、50ml、100ml、500ml、1000ml。
?、谌萘科浚河脕砼渲茦?biāo)準(zhǔn)溶液。常用的規(guī)格有50ml、100ml、500ml、1000ml。
?、鄞蠖且埔汗埽河脕砦《咳芤?。常用的規(guī)格有1ml、5ml、10ml。
?、芸潭纫埔汗埽河脕砦《恐参锷L物質(zhì)溶液。常用的規(guī)格有1ml、5ml、10ml。
?、菀埔汗芗埽河脕矸胖?、固定移液管。
⑥酸度計:用來檢測培養(yǎng)基的pH。
?、咚幬锾炱剑河脕矸Q取配制培養(yǎng)基的藥品。
?、喾治鎏炱剑河脕矸Q取少量有化學(xué)試劑,進(jìn)行化學(xué)分析。
?。?)滅菌器械
?、倌ド翱诓A浚河脕韺χ参锊牧线M(jìn)行表面滅菌。
?、诰凭珶簦河脕磉M(jìn)行接種器材的表面滅菌。
?、奂?xì)菌過濾器:用來過濾不能進(jìn)行高溫滅菌的試劑溶液。
?、軣o菌濾紙:用來汲取器材、植物材料表面的水分。
?、轃o菌脫脂棉:用來進(jìn)行器械、植物材料表面的滅菌處理。
⑥真空泵:用來吸濾滅菌。
?、吒邏簻缇仯簩ε囵B(yǎng)基、接種器材進(jìn)行滅菌處理。
?、嗫烧{(diào)試電爐:用來加熱高壓滅菌鍋。
⑨皮下注射器:用來對溶液進(jìn)行過濾、除菌。
⑩紫外線滅菌燈:用來對接種室、培養(yǎng)室、操作室等工作環(huán)境進(jìn)行滅菌處理。
(5)接種器械
?、俪瑑艄ぷ髋_:用來過濾通過接種工作臺面的空氣,以便進(jìn)行無菌操作。
?、谛⌒蛧婌F器:裝載滅菌藥液,來給超凈工作臺等處噴霧滅菌。
?、垅g頭鑷子:在接種操作、繼代培養(yǎng)時移取植物材料。
④尖頭鑷子:用來分離植物材料。
?、萁馄实叮河脕砬懈钪参锊牧?。
?、薮蚩灼鳎河脕砬腥〈笮∫恢碌膱A柱形植物材料。
?、唠p目顯微鏡:在解剖較小的外植體時,用來觀測材料。
⑧細(xì)菌濾膜:用來進(jìn)行溶液的常溫除菌。
⑨接種針:用來轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)、愈傷組織。
?。?)培養(yǎng)器械
?、僭嚬埽河脕碜鳛橥庵搀w的培養(yǎng)容器。常用的規(guī)格有2cm×15cm、3cm×15cm。
?、谂囵B(yǎng)皿:用來作為外植體的培養(yǎng)容器。常用的規(guī)格有直徑9cm、12cm。
③錐形瓶:即三角燒瓶,主要作為培養(yǎng)器材,常用的規(guī)格有50ml、100ml。
④顯微鏡:用來觀察植物材料。
⑤成套載玻片:用來制作植物材料顯微制片。
?、掬X箔:用于培養(yǎng)容器封口。
⑦橡皮筋:用來束緊培養(yǎng)容器的封口材料。
?、嘌蛴嫈?shù)器:用來進(jìn)行植物細(xì)胞計數(shù)。
?、峥照{(diào):用來調(diào)節(jié)操作間、培養(yǎng)室的溫度。
⑩搖床:用來進(jìn)行細(xì)胞懸浮培養(yǎng)。
組培室設(shè)計規(guī)劃之藥品試劑配置篇
在植物組織培養(yǎng)中,所使用的化學(xué)藥劑通常為化學(xué)試劑,根據(jù)它們的純度化學(xué)試劑可以分為級純(GR.)、分析純(AR.)、化學(xué)純(CP.)等規(guī)格。此外,還有工業(yè)專用、生化試劑等規(guī)格。在研究型的組織培養(yǎng)中,可以采用分析純或極純的藥劑,而在生產(chǎn)型的組織培養(yǎng)中,則可采用化學(xué)純或工業(yè)純的化學(xué)試劑。以MS培養(yǎng)基為例,其使用的常用化學(xué)藥劑如下:
(1)硝酸銨:亦稱硝銨?;瘜W(xué)式為NH4NO3,式量為80.048,其純品為無色透明菱形結(jié)晶,比重1.73,易溶于水,并吸收大量的熱,在空氣中容易潮解。水溶液呈中性反應(yīng)。由于硝酸銨是一種易燃、易爆物,因此在使用中應(yīng)該貯存在陰冷之處。已經(jīng)結(jié)塊的硝酸銨切忌敲打、撞擊,可用水進(jìn)行溶解。
(2)硝酸鉀:亦稱火硝?;瘜W(xué)式為KNO3,式量為101.104,其純品為無色透明的棱柱結(jié)晶,比重2.10,易溶于水,幾乎不溶于無水乙醇。
(3)氯化鈣:亦稱無水氯化鈣?;瘜W(xué)式為CaCl2,式量為110.99,其純品為白色結(jié)晶,比重2.15,在空氣中具強(qiáng)吸濕性,易溶于水同時放出大量的熱。
(4)硫酸鎂:亦稱瀉鹽?;瘜W(xué)式為MgSO4?7H2O,式量為246.50,其純品為透明菱形結(jié)晶,比重1.68,具苦味,易溶于水,不溶于乙醇,在空氣中稍風(fēng)化。
(5)磷酸二氫鉀:亦稱磷酸鉀復(fù)合肥?;瘜W(xué)式為KH2PO4,式量為136.09,其純品為正方形無色結(jié)晶,比重2.33,有較強(qiáng)的酸味,易溶于水,不溶于乙醇。溶液呈微酸性反應(yīng)。磷酸二氫鉀在96℃時會溶化成透明的液體,這樣就會轉(zhuǎn)化為偏磷酸鉀,因此在使用時注意不要使它經(jīng)受高溫環(huán)境。
(6)碘化鉀:化學(xué)式為KI,式量為166.02,其純品為透明的小塊結(jié)晶,比重3.115,在干燥的空氣中穩(wěn)定,易溶于水,其水溶液在遇光后因析出游離碘而逐漸變黃。
(7)硼酸:亦稱正硼酸?;瘜W(xué)式為H3BO3,式量為61.84,其純品為六角形白色鱗片狀結(jié)晶,具珠光,比重1.46,溶于水,易溶于乙醇,當(dāng)加熱至107℃時會失去部分的水,而轉(zhuǎn)變?yōu)槠鹚?。水溶液呈酸性反?yīng)。
(8)硫酸錳:化學(xué)式為MnSO4?5H2O,式量為241.07,其純品為紅色結(jié)晶,比重2.1,具金屬味,易溶于水,不溶于乙醇。在制備過程中,如果溶液在-4~6℃間結(jié)晶時,可制成七水硫酸錳(MnSO4?7H2O);在20~40℃間時,可獲得四水硫酸錳(MnSO4?7H2O);在280℃時加熱,帶有結(jié)晶水的硫酸錳直至恒重,則可獲得無水硫酸錳(MnSO4)。
(9)硫酸鋅:亦稱鋅礬?;瘜W(xué)式為ZnSO4?7H2O,式量為287.55,其純品為無色菱形結(jié)晶,比重1.96,在干燥的空氣中會風(fēng)化,易溶于水,當(dāng)39℃時溶于所含結(jié)晶水,并轉(zhuǎn)變?yōu)閆nSO4?6H2O。
(10)鉬酸鈉:化學(xué)式為Na2MoO4,式量為241.98,其純品為無色結(jié)晶,溶于水。
(11)硫酸銅:亦稱膽礬?;瘜W(xué)式為CuSO4?5H2O,式量為249.71,其純品為深藍(lán)色結(jié)晶,比重2.29,具強(qiáng)烈的金屬味,易溶于水,在干燥的空氣中容易風(fēng)化,而變成白色粉末,即無水硫酸銅。水溶液呈弱酸性反應(yīng)。
(12)氯化鈷:亦稱氯化亞鈷?;瘜W(xué)式為CoCl2?6H2O,式量為372.26,其純品為紅色單斜結(jié)晶,比重1.84,在[室溫下穩(wěn)定,極易溶于水,可溶于乙醇。在45~52℃時加熱,會逐漸變?yōu)镃oCl2?4H2O。
(13)乙二胺四乙酸二鈉:化學(xué)式為Na2EDTA?2H2O,式量為372.26,其純品為白色結(jié)晶狀粉末,無味、無毒、可溶于水,容易和金屬離子形成絡(luò)合物。
(14)硫酸亞鐵:亦稱黑礬、鐵礬?;瘜W(xué)式為FeSO4?7H2O,式量為278.02,其純品為淡綠色結(jié)晶,比重1.89,易溶于水,不溶于乙醇,在干燥空氣中風(fēng)化而變?yōu)榘咨勰?/p>
(15)甘氨酸:亦稱氨基醋酸、氨基乙酸?;瘜W(xué)式為C2H5NO2,式量為75.07。純品為白色結(jié)晶性粉末。味甜,能溶于水,微溶于醇,幾乎不溶于醚。233℃開始分解。密封閉光保存。
(16)肌醇:亦稱環(huán)已六醇?;瘜W(xué)式為C6H12O6,式量為180.16。為構(gòu)建細(xì)胞壁的材料。它在離子平衡、磷脂代謝、碳水化合物合成等過程中起著重要的作用。
(17)煙酸:亦稱維生素B5?;瘜W(xué)式為C6H5NO2,式量為123.11。純品為無色針狀結(jié)晶。無氣味,在空氣中穩(wěn)定,能溶于水、乙醇、不溶于醚、酯類溶劑。熔點(diǎn)236℃。密封閉光保存。
(18)鹽酸吡哆醇:亦稱維生素B6、鹽酸吡哆素?;瘜W(xué)式為C8H12ClNO3,式量為205.64。純品為白色結(jié)晶。無氣味,在空氣中穩(wěn)定,能溶于水、乙醇,不溶于酸。205~212℃分解。密封閉光保存。
(19)鹽酸硫胺素:亦稱維生素B1?;瘜W(xué)式為C12H17ClN4OS?HCl,式量為337.28。純品為白色結(jié)晶。在空氣中穩(wěn)定,能溶于水、乙醇,不溶于酸。密封閉光保存。
(20)6-芐基腺嘌呤:縮寫為BA,亦稱6-BA、普魯馬林。是一種植物生長調(diào)節(jié)劑,化學(xué)式為C12H11N5,式量為225.26。純品為白色結(jié)晶,熔點(diǎn)235℃,難溶于水,易溶于丙酮、乙醇等有機(jī)溶劑,在酸性介質(zhì)中較為穩(wěn)定。其主要的生理作用為能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成,誘導(dǎo)芽分化,延緩葉衰老,促進(jìn)細(xì)胞分裂。
(21)萘乙酸:縮寫為NAA,亦稱α-萘乙酸、生長素、1-萘乙酸。是一種植物生長調(diào)節(jié)劑,化學(xué)式為C12H10O2,式量為186.20。純品為白色針狀結(jié)晶,熔點(diǎn)133~135℃,沸點(diǎn)285℃(分解)。在冷水中微溶,在熱水中易溶,易溶于冰醋酸、丙酮、乙醚等有機(jī)溶劑中。在空氣潮解,見光會變色。它有α和β兩種類型,通常所說的萘乙酸指的是α型。其主要生理作用為能夠誘導(dǎo)根分化,防止器官脫落,誘導(dǎo)無籽果實(shí),促使種子萌發(fā)等。
(22)腺嘌呤:縮寫為AD,化學(xué)式為C5H5N5?3H2O,式量為189.13。純品為白色結(jié)晶性粉末。在空氣中穩(wěn)定,微溶于水。它是合成細(xì)胞分裂素的前體,主要的生理功能為促進(jìn)細(xì)胞分裂。
(23)赤霉酸:縮寫為CA3,亦稱激動素,濫長素、九二零等。是一種植物激素,純品為八面體雙錐形白色結(jié)晶,熔點(diǎn)233-235 (分解),難熔于水,其鉀鹽、鈉鹽易溶于水,易熔于丙酮、甲醇、乙醇。赤霉素的化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定,但應(yīng)該在低溫環(huán)境下進(jìn)行貯藏,其水溶液不穩(wěn)定。其主要的生理作用為促進(jìn)細(xì)胞的伸長,防止離層形成,能夠解除休眠。
(24)蔗糖:化學(xué)式為C12H22O11,式量為342.30。純品為無色單斜型結(jié)晶、白色顆粒或晶體粉未。味甜,在空氣中穩(wěn)定,易溶于水,能溶于乙醇,可被稀酸水解為果糖、葡萄糖。在160-180℃間分解。密封保存。
(25)瓊脂:亦稱洋菜。是從石花菜等海藻中所提取的白色粘膠狀物質(zhì),在熱水中能溶解,其溶液遇冷凝固,可用于配制培養(yǎng)基,作為外植體的支撐物。
(26)肌醇:化學(xué)式為C6H12O6,式時為180.16。純品為白色結(jié)晶粉末,有甜味,在空氣中不潮解。溶于水,微溶于醇,熔點(diǎn)225-227℃。密封保存。
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