組織培養(yǎng)的方法和步驟有知道嗎？

　　組培室標(biāo)準(zhǔn)操作

　　一 生產(chǎn)環(huán)境

　　1 工作人員進(jìn)入組培室必須穿工作服，包括更換拖鞋、穿白大褂，接種人員還要帶帽、帶口罩。

　　2 所有人員在組培室內(nèi)不準(zhǔn)高聲喧嘩、打鬧。

　　3 工作期間，各生產(chǎn)房間要關(guān)閉房門，尤其是接種間；工作人員出入要隨手關(guān)門。

　　4 各種生產(chǎn)用品要安固定的位置排放整齊，不可亂拿亂放。

　　5 工作過(guò)程中所產(chǎn)生的垃圾要及時(shí)清理，尤其是接種間，其內(nèi)垃圾停留時(shí)間不得超過(guò)4小時(shí)。

　　二 接種程序

　　1. 準(zhǔn)備工作：接種人員在正式接種之前要做好準(zhǔn)備工作，包括準(zhǔn)備酒精燈、新潔爾滅、滅菌用脫脂棉以及準(zhǔn)備接種工具、分取培養(yǎng)基、接種用苗和工作臺(tái)滅菌等。

　　·酒精燈用工業(yè)酒精作燃料，而非75%酒精。

　　·工作臺(tái)上用的新潔爾滅濃度是0.1%，而非0.01%。

　　·工作臺(tái)滅菌包括兩步：一是上臺(tái)前用紫外燈照射30分鐘，二是正式接種前再用新潔爾滅仔細(xì)擦一遍。

　　·培養(yǎng)皿的取放：從布包里取培養(yǎng)皿時(shí)，一定要注意，手不能接觸培養(yǎng)皿的邊沿，同時(shí)要盡可能減少與培養(yǎng)皿的接觸面，一般規(guī)定只能用雙手的拇指和食指取放。

　　·接種工具滅菌也分兩步，一是用滅菌布包裹好，在高壓鍋里滅一次，這一步由滅菌人員負(fù)責(zé)完成；二是在工作臺(tái)上，從布包里取出后，先用酒精擦拭一下，再放在酒精燈火焰上灼烤一遍，其要求是工具的每一點(diǎn)在火焰上灼烤時(shí)間不得少于5秒鐘。在工具滅菌之前，工作人員的手部，包括手腕，都要用酒精仔細(xì)擦拭一遍。

　　2 接（轉(zhuǎn)）苗：包括取苗、切苗和接苗三步。

　　·取苗：先解開培養(yǎng)瓶的瓶蓋（封口膜），如果不能一次取出其內(nèi)的全部材料，要先把封口膜（瓶蓋）口對(duì)者風(fēng)源放在酒精燈的左前方，然后把瓶口在酒精燈上烤7～10秒；正式取苗時(shí)，瓶口不要斜向外；一次取苗不可太多，以免風(fēng)干。

　　·切苗：培養(yǎng)皿放在離風(fēng)窗10～20厘米處，不可太往外；鑷子和手術(shù)刀都不可太熱，是涼的，且在操作過(guò)程中，刀和鑷都要培養(yǎng)皿斜上方操作，不可在其正上方操作；在切苗過(guò)程中產(chǎn)生的垃圾可堆放在培養(yǎng)皿內(nèi)的一側(cè)位置上，若非迫不得已，不可弄到培養(yǎng)皿外。

　　·接苗：培養(yǎng)瓶蓋（或封口膜）的放置方法和及瓶口灼烤方法與取苗時(shí)的相同，烤完瓶口后，要先倒掉瓶?jī)?nèi)多余的水分，然后在接苗；接苗時(shí)，鑷子不要與瓶口接觸，一瓶?jī)?nèi)一般接5～6棵苗，不要放得太多；組培苗在瓶?jī)?nèi)要排放均勻、整齊、美觀。

　　·封口、記錄：封口膜要及時(shí)捆綁，其松緊度以用手轉(zhuǎn)不動(dòng)為準(zhǔn)；下臺(tái)前要把品種代號(hào)、培養(yǎng)基類型、個(gè)人編號(hào)以及接種日期標(biāo)示到瓶上。離開之前還要把工作臺(tái)收拾干凈，把接種過(guò)程中產(chǎn)生的垃圾清理掉，臺(tái)上的物品也要擺放整齊。

　　三 組培苗的管理

　　1.瓶苗要整齊的擺放在自己的組培架上，不可亂放。

　　2.接種人員每天都要統(tǒng)計(jì)自己的接種數(shù)量，包括轉(zhuǎn)前瓶數(shù)和轉(zhuǎn)后瓶數(shù)。

　　3.值日人員要定時(shí)開燈、關(guān)燈，保證組培苗有足夠的光照時(shí)間，但也不可過(guò)長(zhǎng)，以每天14小時(shí)左右為宜。

　　四 接種用具的清洗

　　1.洗刷培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿：第一步：把培養(yǎng)瓶培養(yǎng)皿放入洗潔凈溶液里，先用毛刷清洗內(nèi)部，再用鋼絲球把外面的字清洗掉。第二步：把他們?cè)儆们逅疀_洗3-5遍。第三步：把瓶?jī)?nèi)的積水倒掉，倒放在準(zhǔn)備臺(tái)，準(zhǔn)備臺(tái)上要先放一層紗布。這一步的清潔標(biāo)準(zhǔn)是：涼干的瓶壁（器皿）內(nèi)外無(wú)明顯的斑點(diǎn)、污跡。

　　2.洗涮鑷子：用洗潔精浸泡五分鐘，用鋼絲球打磨一下然后放入清水沖洗三遍。

　　五 滅菌

　　1.對(duì)污染苗滅菌：一經(jīng)發(fā)現(xiàn)就隨即滅菌處理，大量的進(jìn)行高壓滅菌，少量的加入工業(yè)酒精在室外進(jìn)行處理。

　　2.室內(nèi)空氣滅菌：每四周用高錳酸鉀和甲醛對(duì)室內(nèi)空氣滅一次菌。

　　3.室內(nèi)地面：每2－3天用新潔爾滅拖一遍地。

　　4.臥式和手提式高壓滅菌鍋使用程序：嚴(yán)格按使用說(shuō)明書操作。