植物組培實(shí)驗(yàn)室的原理和步驟

  　一、培養(yǎng)材料的采集

　　組織培養(yǎng)所用的材料非常廣泛，可采取根、莖、葉、花、芽和種子的子葉，有時也利用花粉粒和花藥，其中根尖不易滅菌，一般很少采用。

　　對于木本花卉來說，闊葉樹可在一、二年生的枝條上采集，針葉樹種多采種子內(nèi)的子葉或胚軸，草本植物多采集莖尖。

　　在快速繁殖中，最常用的培養(yǎng)材料是莖尖，通常切塊在0.5厘米左右，如果為培養(yǎng)無病毒苗而采用的培養(yǎng)材料通常僅取莖尖的分生組織部分，其長度在0.1毫米以下。

　　二、培養(yǎng)材料的消毒

　?。ㄒ唬┫葘⒉牧嫌昧魉疀_洗干凈，最后一遍用蒸餾水沖洗，再用無菌紗布或吸水紙將材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小塊。

　?。ǘ┰跓o菌壞境中將材料放入70％灑精中浸泡30－60秒。

　?。ㄈ┰賹⒉牧弦迫肫追鄣娘柡鸵夯?.01％升汞水中消毒10分鐘。

　?。ㄋ模┤〕龊笥脽o菌水沖洗三、四次。

　　三、制備外植體

　　將已消毒的材料，用無菌刀、剪、鑷等，在無菌的環(huán)境下，剝?nèi)パ康镊[片、嫩枝的外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，這就是外植體。在操作中嚴(yán)禁用手觸動材料。

　　四、接種和培養(yǎng)

　　（一）接種　

　　在無菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養(yǎng)基上，每瓶接種4－10個。

　　（二）封口　

　　接種后，瓶、管用無菌藥棉或蓋封口，培養(yǎng)皿用無菌膠帶封口。

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　　培養(yǎng)基大多應(yīng)保持在25℃左右，但要因花卉種類及材料部位的不同而區(qū)別對待。

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　　外植體的增殖是組培的關(guān)鍵階段，在新梢等形成后為了擴(kuò)大繁殖系數(shù)，需要繼代培養(yǎng)。把材料分株或切段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基一般在分化培養(yǎng)基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1個月左右后，可視情況進(jìn)行再增殖。

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　　繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽等一般沒有根，必須轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。1個月后即可獲得鍵壯根系。

　　五、組培苗的練苗移栽

　　試管苗從無菌到光、溫、濕穩(wěn)定的環(huán)境進(jìn)入自然環(huán)境，必須進(jìn)行煉苗。一般移植前，先將培養(yǎng)容器打開，于室內(nèi)自然光照下放3天，然后取出小苗，用自來水把根系上的營養(yǎng)基沖洗干凈，再栽入已準(zhǔn)備好的基質(zhì)中，基質(zhì)使用前最好消毒。移栽前要適當(dāng)遮蔭，加強(qiáng)水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98％左右），但基質(zhì)不宜過濕，以防爛苗。