植物組織培養(yǎng)實驗室設(shè)計方案

     一、植物組織培養(yǎng)實驗室的設(shè)置

　　植物組織培養(yǎng)實驗室與其他實驗室的主要區(qū)別是要求無菌操作，避免微生物及其他有害因素的影響。植物組織培養(yǎng)實驗室的面積大小和裝備取決于兩個因素：一是實驗性質(zhì)和研究內(nèi)容，二是能承受的經(jīng)費能力。然而，一個標(biāo)準(zhǔn)的植物組織培養(yǎng)實驗室必須具備下列條件：①清洗和儲存玻璃器皿、塑料器皿和其他實驗器皿；②培養(yǎng)基的配制、滅菌和儲存；③植物材料的無菌操作；④可控溫度、光照、濕度等條件，以便對材料進(jìn)行體外培養(yǎng)；⑤培養(yǎng)物生長發(fā)育過程的顯微觀察。因此，植物組織培養(yǎng)實驗室至少需要有三間相連但相互隔開的房間：第一間用于玻璃器皿的清洗和儲存，以及培養(yǎng)基的制備(稱為培養(yǎng)基室)；第二間用于無菌操作(稱為接種室)；第三間用于放置培養(yǎng)物(稱為培養(yǎng)室)。此外，如果條件許可，應(yīng)配備能進(jìn)行組織和細(xì)胞生長顯微觀察的細(xì)胞學(xué)實驗室。

　　(一)培養(yǎng)基室

　　培養(yǎng)基室的清洗區(qū)應(yīng)備有各種類型的毛刷、大水槽和冷熱水源。此外，還應(yīng)備有塑料桶，用以浸泡需要清洗的實驗室器皿；鼓風(fēng)干燥箱，用以干燥清洗后的器皿；防塵廚，用以儲存干凈的器皿。條件允許的話，清洗區(qū)應(yīng)單獨設(shè)一個房間。如果培養(yǎng)基的制備和器皿的清洗在同一個房間內(nèi)進(jìn)行，應(yīng)特別注意不要使清洗干擾培養(yǎng)基的制備，嚴(yán)格防止肥皂水等濺入培養(yǎng)基內(nèi)。可以在清洗區(qū)與培養(yǎng)基制備區(qū)之間臨時加一塊擋板，或把清洗時間和配制培養(yǎng)基時間錯開。

　　配制培養(yǎng)基所需的一般設(shè)備包括以下幾種。①工作臺：工作臺的高度應(yīng)適合于操作人員工作，要求表面平整、耐高溫、放置水平。②低溫冰箱：用以儲存長期保存的藥品。③普通冰箱：用以儲存各種化學(xué)藥品、植物材料和短期儲存儲備液及母液等。④大塑料瓶：用以儲存蒸餾水。⑤天平：用于稱量。⑥電熱磁力攪拌器：用以溶解化學(xué)藥品。⑦電爐：用于加熱溶化瓊脂和手提式高壓滅菌鍋的加熱。⑧酸度計或pH試紙。⑨抽氣機或真空泵：用以輔助過濾滅菌。⑩恒溫水?。河糜谌诨傊＂飧邏簻缇仯河靡赃M(jìn)行培養(yǎng)基滅菌。⑩其他用具。

　　(二)接種室

　　接種室也稱為無菌操作室，好能與外界隔離，不能穿行或不受其他干擾。接種室分更衣間、緩沖間及操作間三部分。更衣間供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩之用。緩沖間位于更衣間與操作間之間，目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境，同時可放置恒溫箱及某些小型儀器。操作間則用于無菌操作，其大小要適當(dāng)，且其頂部不宜過高以保證紫外線的滅菌效果，墻壁光滑無死角以便清洗和消毒。接種室為密閉式，用紫外線滅菌燈進(jìn)行空氣消毒。有些實驗室使用電子消毒滅菌器，它在高壓電場作用下，電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強氧化劑，能與細(xì)菌的胞膜及酶蛋白進(jìn)行氧化分解反應(yīng)，因此靠臭氧氣體彌漫性擴散達(dá)到殺菌的目的，使消毒時沒有死角。消毒后空間內(nèi)的殘留臭氧只需30～40min即能自行還原成氧氣，對空間不留異味、消毒物體表面不留殘毒。

　　接種室的主要儀器設(shè)備是超凈工作臺。超凈工作臺可直接購買，安裝方便，占用空間小且凈化效果很好，為植物組織培養(yǎng)工作提供了好的無菌操作環(huán)境。

　　(三)培養(yǎng)室

　　培養(yǎng)室的溫度必須是可控的，一般是用空調(diào)或熱風(fēng)機使溫度保持在(25±12)℃。若要求更高或更低的溫度，可使用裝有熒光燈的培養(yǎng)箱。培養(yǎng)箱可安裝在培養(yǎng)室之外任何方便和安全的地方。

　　植物組織培養(yǎng)要求一定的光照，采用日光燈源，一般光照強度為1000～30001x。但有些實驗需要在散射光下進(jìn)行，有些則要求完全黑暗條件。因此，在設(shè)備上對此應(yīng)有所準(zhǔn)備。光源可由自動定時開關(guān)控制。暗培養(yǎng)一般是在特制的木櫥內(nèi)進(jìn)行或加蓋黑布。

　　培養(yǎng)室的濕度應(yīng)控制在相對濕度80％左右，當(dāng)培養(yǎng)室的相對濕度降低到50％以下時，應(yīng)采取措施增加濕度，以免培養(yǎng)基變干。如果濕度太高則應(yīng)除濕，以免培養(yǎng)瓶蓋塞發(fā)潮，增加污染的機會。

　　在培養(yǎng)室內(nèi)應(yīng)設(shè)有若干培養(yǎng)架以放置培養(yǎng)物。培養(yǎng)架大小一般為1200mm×600mm×400mm，層數(shù)根據(jù)培養(yǎng)室的空間高度而定，每層培養(yǎng)架裝上玻璃板。但玻璃板下面的日光燈在工作時易使玻璃發(fā)熱，使放置其上的培養(yǎng)瓶及培養(yǎng)基的溫度增加，影響培養(yǎng)效果。安裝剛硬的鐵絲網(wǎng)或細(xì)鋼管，在其上放篩孔塑料盤，以便空氣流動和穩(wěn)定溫度，同時也可使頂層的燈光能透射到下層的培養(yǎng)物上。培養(yǎng)架可以木制也可以鋼制，每層分別裝有日光燈管。燈管和上一層架子之間裝有隔熱層，以免上層培養(yǎng)物的底部受熱。

　　三角瓶、玻璃罐或培養(yǎng)皿都可直接置于培養(yǎng)架上，或先置于大小合適的盤子上。再將盤子置于培養(yǎng)架上。所用的容器若為試管，就需要有試管架。試管架可用鐵絲制作，每個試管架能裝25個或50個試管。培養(yǎng)容器必須粘上標(biāo)簽或用記號筆標(biāo)注，注明詳細(xì)的實驗細(xì)節(jié)(植物名稱、外植體、培養(yǎng)基、培養(yǎng)時間等)。

　　培養(yǎng)室內(nèi)應(yīng)設(shè)有搖床，以便進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)。搖床可以是平動式的，也可以是旋轉(zhuǎn)式的。應(yīng)選購溫光可控式搖床。