組織培養(yǎng)過程遇到污染如何處理

組織培養(yǎng)過程中的污染源主要有以下幾種：

(1)戶外風(fēng)大，菌類進(jìn)屋機(jī)會多。有風(fēng)就有沙，有沙就有塵，有塵就有菌，菌塵共存，這是菌類進(jìn)屋的主要原因之一。

(2)屋內(nèi)太潮，菌類繁衍多。需保持室內(nèi)空氣干燥，如使用空調(diào)“除濕”功能，也可減少真菌生長繁殖。

(3)人員帶菌多。在整個操作室內(nèi)，人員可說是最大的帶菌者，不管在毛發(fā)或是衣服等地方，都隱藏著數(shù)不清的菌類。在進(jìn)入操作室前，最好能對作業(yè)人員進(jìn)行清潔處理，比如換上干凈的白大褂，換上實驗室的鞋，衣服鞋每星期洗一次，上超凈臺前手要用肥皂清洗兩遍，接種前手再用酒精擦拭一遍。

(4)屋內(nèi)不干凈。紫外線能殺滅或抑制真菌生長，因此應(yīng)在每次接種前進(jìn)行20分鐘的紫外燈消毒。

(5)清理屋內(nèi)帶菌組培苗。在植物病害中，真菌所引起的病害尤其嚴(yán)重，且因會產(chǎn)生孢子，隨著空氣飄散。一旦落入適當(dāng)?shù)沫h(huán)境下，一粒小小的孢子便會擴(kuò)大成一個菌落，污染整個組織培養(yǎng)瓶。因此一旦有真菌污染的組培苗，就要用高壓滅菌器徹底消滅，以防擴(kuò)散。(6)接種不正確。不正確操作也會增加污染機(jī)率，如開蓋太快，滅菌不夠，操作過慢等。接種過程應(yīng)該輕開蓋，快操作。

組培室污染原因

若污染菌類是零星分散在培養(yǎng)基中，則可確定是人為引起的污染，比如培養(yǎng)基滅菌不徹底;超凈工作臺長時間不換濾網(wǎng)，致使凈化能力降低;接種用具滅菌不徹底;操作不正確，動作生硬緩慢，開瓶時間太久，接種臺擺放物品雜亂，操作中心在人體范圍之內(nèi);接種室長期不滅菌，菌類太多等。

若污染菌類是從材料周圍長起，則可證明是植物材料帶菌引起?？赡苁墙臃N用具滅菌不徹底，接種時材料被污染;或者是未及時發(fā)現(xiàn)污染苗，接種過程交叉感染等。

若菌類從材料培養(yǎng)基以上部分長起，而不是從培養(yǎng)基先長起，且發(fā)生在5天以后，則說明是材料帶的內(nèi)生菌。若從培養(yǎng)基以下開始長菌，發(fā)生時間較早，且有從里向外的趨勢，則說明是切口引起的污染，原因可能是滅完菌后，未剪去兩個切口或雖剪但器具帶菌。

污染苗如何搶救？

真菌污染后，如果已形成孢子，則必須經(jīng)高壓滅菌后扔掉，即使僅形成菌絲也應(yīng)處理后扔掉，因為菌絲能夠達(dá)到材料內(nèi)部，因此，真菌污染是滅絕性的。

細(xì)菌污染后，由于細(xì)菌繁殖是靠芽孢，細(xì)菌不會彌散在整個空間，因此只要及時發(fā)現(xiàn)，可將材料上部未感菌的部分剪下轉(zhuǎn)接，材料仍可以用。